篩選獲得一株生物表麵活性劑產生菌，經生理生化與16S rDNA鑒定，獲得菌株為銅綠假單胞菌147（Pseudomonas aeruginosa 147）。發酵產物經過薄層色譜、紅外掃描分析其發酵產物為糖脂類生物表麵活性劑（Biosesurfactant，BS），單因素最佳發酵條件優化為碳源、氮源和碳氮比分別為花生油、硫酸銨和25∶1，最佳培養溫度為30℃，pH值為8，NaCl濃度為5 g·L-1。在最佳條件下培養36 h，發酵液的表麵張力值比原來降低了42.08 mN·m-1，且能平穩保持至144 h。在108 h細菌生物量最大，為2.63 g·L-1，此時產生的糖脂最多，可達2.02 g·L-1。生物表麵活性劑對不同環數的多環芳烴類物質（熒蒽、芘、苯［a］芘）的增溶效果實驗表明：隨生物表麵活性劑添加量的增大，不同PAHs溶解度均增大；相同濃度生物表麵活性劑添加條件下，高環多環芳烴（苯［a］芘）的增溶效果低於低環多環芳烴（熒蒽、芘）。

多環芳烴（Polycyclicaromatichydrocarbons，PAHs）是一類由2個或2個以上苯環組成的稠環化合物。其水溶性低，易吸附於固體顆粒，能夠長期存在於環境中，是一類持久性有機汙染物，也是美國國家環境保護局（U.S.Environmental Protection Agency）確定的優先控製的汙染物。由於PAHs高脂溶性，低生物可利用性，使得人們將其用於環境中的修複措施和效果存在局限。因此通過利用表麵活性劑的膠團化作用，顯著提高疏水性有機化合物在水相中的表觀溶解度，從而提高其生物有效性，促進修複效果的表麵活性劑強化修複技術（Surfactant enhanced remediation，SER）引起人們的關注。

目前在有機汙染修複過程中使用的多為化學表麵活性劑。由於化學表麵活性劑不易降解、易造成二次汙染、對土壤微生物產生毒害風險，限製了其在環境修複中的應用。生物表麵活性劑以其具有降低表麵張力、穩定乳化液等的作用，其主要成分糖脂、磷脂、脂蛋白或脂肽類化合物、高分子化合物和脂多糖，能夠被生物完全降解，安全無毒，且用量少，發酵成本低，逐漸成為研究熱點。已有文獻報道通過篩選產表麵活性劑的細菌，並將其應用於多環芳烴汙染的修複。

生物表麵活性劑合成方式包括動植物細胞內提取法、酶合成法、微生物發酵法。然而，動植物細胞內提取法受到原料來源的製約，難以大規模生產，酶合成法所用酶製劑的價格亦極大限製了其發展。相比而言，微生物發酵以其生產工藝簡單、經濟安全的特點，成為重要的生物表麵活性劑來源。目前，已有很多微生物被發現能夠產生生物表麵活性劑，如細菌類球擬酵母（Torulopsis bombicola）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、銅綠假單胞菌（Pseudomonas aerug-inosa），其中銅綠假單胞菌已有Pseudomonas cepacia CCT6659、Pseudomonas aeruginosa S6等見諸報道。它們產生的生物表麵活性劑是目前在多環芳烴汙染土壤修複，石油汙染修複等應用較多，生物表麵活性劑在增溶多環芳烴時具有生物降解性、低毒性、適應極端環境的優勢。

本研究以PAHs為目標汙染物，篩選產生物表麵活性劑的菌株，並分析發酵產物為生物表麵活性劑，優化發酵條件，探討菌株產生的生物表麵活性劑對典型多環芳烴熒蒽、芘、苯［a］芘的增溶作用，研究結果將為PAHs汙染環境的修複技術研究提供菌株資源和基礎理論支撐。

1材料與方法

1.1供試土壤

采集南京煉油廠附近土樣、北京某加油站附近土樣、南京某河底淤泥和南京某湖底淤泥為土壤樣品。

1.2供試培養基與試劑

富集培養基：（NH4）2SO410.00 g，KCl 1.10 g，KH2PO43.40 g，K2HPO44.40 g，MgSO40.50 g，EDTA 1.00 g，酵母粉0.50 g，液體石蠟5.00 mL，pH 7.0～7.4，FeSO4·7H2O 0.01 g，用蒸餾水定容到1.00 L。

LB液體培養基：10.00 g蛋白腖，5.00 g酵母粉，10.00 g氯化鈉，用無菌水定容至1.00 L。

LB固體培養基：在LB液體培養基加入15.00～20.00 g瓊脂粉。

無機鹽培養基：（NH4）2SO41.00 g，NaCl 10.00 g，KH2PO40.20 g，K2HPO40.80 g，MgCl20.50 g，CaCl20.05 g，FeCl20.01 g。

血平板培養基：購自南京便診生物科技有限公司。

實驗試劑：甲醇為色譜純，花生油為食用級，其他試劑均為分析純。

1.3細菌篩選和鑒定

1.3.1表麵活性劑產生菌血平板初篩

取5.00 g新鮮土樣置於裝有45 mL富集培養基的250 mL三角瓶中，28℃、150 r·min-1搖床培養7 d，待培養液混濁後，吸取5 mL培養液重新轉接入新的富集培養基中，按上述條件培養，轉接3次。後經濃度梯度稀釋，100μL塗布於血平板，30℃培養48h，選擇透明圈較大的菌落，分離純化，4℃保存。

1.3.2粉色视频黄色网站複篩

將上述純化的菌種接種於LB液體培養基中，200 r·min-1、30℃培養96 h後，用粉色视频黄色网站測定細菌發酵液的表麵張力。

1.3.3細菌鑒定

基於細菌形態與生理生化結果，根據《伯傑氏細菌鑒定手冊》做出初步鑒定。同時將菌株用LB液體培養基培養至對數生長期，離心法收集菌體，並采用SDS-CTAB法提取總基因組DNA，以細菌通用引物27F和1492R進行16S rDNA的PCR擴增，運用分子學鑒定菌株。